腫瘤轉移是造成患者死亡的一個重要原因，近年來研究發現上皮間質化（EMT）是在乳腺癌的轉移過程中發揮重要作用。在EMT進程中，上皮細胞失去極性，細胞間連接變得鬆散，乳腺癌更容易發生轉移。

研究發現TGF-β1參與誘導乳腺癌上皮間質化。並且，TGF-β1不僅可以通過SMAD信號通路，還可以通過MAPK、Rho-likeGTPases、以及PI3K誘導EMT的發生。

近年來miRNAs在乳腺癌中的作用被廣泛研究，其中MiR-10b, miR-21 以及miR-181a已被報道參與TGF-β1誘導乳腺癌EMT現象的發生。

作者研究中發現在TGF-β1誘導乳腺癌細胞系中miR-23表達升高，為了探究其是否參與乳腺癌EMT進程，作者進行了以下研究。

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1.驗證miR-23中的表達

作者檢測了多株乳腺癌細胞系：MCF-7, T47D, MDA-MB-468,BT-549以及MDA-MB-231發現miR-23在MDA-MB-231中顯著高於MCF-7。在發生淋巴結轉移的乳腺癌患者中發現miR-23高表達，提示miR-23可能促進腫瘤進程。作者對MDA-MB-231、MCF-7細胞給予TGF-β1誘導發現miR-23在12h,24h均發生明顯上調。

2.探究miR-23在TGF-β1誘導乳腺癌EMT過程中的作用。

• （1）作者發現在miR-23莖環序列中存在Smad結合原件序列 ：5』-CAGGG-3』。在TGF-β1誘導處理后，野生型pre-miR-23a表達顯著升高。但將miR-23的Smad結合原件序列5』-CAGGG-3』突變后，pre-miR-23a無明顯變化。同時，GST-Smad的pulldown實驗發現pre-miR-23a可以結合到smad上，且主要結合MH1功能域。

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• （2）作者通過向MCF-7與MDA-MB-231轉染miR-23a的抑製劑，給予TGF-β1處理后檢測發現乳腺癌細胞中E-cadherin表達上調;細胞划痕實驗發現給予miR-23a抑製劑后細胞的遷移能力減弱;細胞侵襲實驗發現給予miR-23a抑製劑后細胞的侵襲能力減弱。同時，腫瘤細胞在裸鼠體內轉移能力降低。

探究miR-23在TGF-β1誘導乳腺癌EMT過程中的機制。

• （1）為了探究miR-23調控乳腺癌細胞遷移與侵襲能力的機制，尋找到miR-23的靶基因CDH1，並經過雙熒光報告實驗驗證miR-23a可以結合CDH1的3』UTR區域。蛋白免疫印跡實驗驗證miR-23a轉染細胞后，CDH1蛋白水平顯著降低。並且乳腺癌細胞給予TGF-β1處理后，CDH1mRNA水平降低。

• （2）為了探究miR-23的靶基因CDH1在TGF-β1誘導乳腺癌EMT過程中的作用，作者給予乳腺癌細胞miR-23抑製劑處理，同時使用siCDH1沉默CDH1基因表達，研究發現miR-23ainhibitor可以抑制乳腺癌細胞發生遷移和侵襲，而siCDH1可以挽救恢復乳腺癌細胞的遷移和侵襲能力。裸鼠實驗發現給予miR-23ainhibitor的同時抑制CDH1表達，裸鼠體內乳腺癌更易發生肺轉移。

• （3）作者設想miR-23a調控E-cadherin可能是參與激活Wnt/β-catenin信號通路進而促進乳腺癌的侵襲。而研究發現β-catenin在胞漿內大量積聚並進入細胞核，與TCF/LEF轉錄因子結合，激活相關基因的轉錄，從而導致了細胞增殖異常和腫瘤發生。

  作者首先進行蛋白亞細胞組分的測定實驗，發現上調miR-23a可以導致β-catenin在細胞核中的積聚。然而，上調E-cadherin可以抑制Wnt/β-catenin的活性。作者選用siRNA敲減TCF4與LEF1后，抑制β-catenin 信號通路，顯著減弱細胞的侵襲能力。

文章結論：

1. TGF-β1處理乳腺癌細胞后，可引起miR-23a表達上調，引起EMT現象的發生。

2.TGF-β1誘導乳腺癌細胞EMT過程中，抑制miR-23a可以引起E-cadherin表達上調，乳腺癌細胞遷移、侵襲、轉移能力降低。

3. miR-23a通過調控靶基因CDH1參與激活Wnt/β-catenin信號通路，進而參與調控E-cadherin，促進乳腺癌的遷移、侵襲、轉移過程。

參考文獻：Ma F, Li W, Liu C, et al. MiR-23a promotes TGF-β1-inducedEMT and tumor metastasis in breast cancer cells by directlytargeting CDH1 and activating Wnt/β-catenin signaling[J].Oncotarget, 2017.

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