大鼠、小鼠心臟幹細胞（祖細胞）分離培養方法

心臟病是引起人類死因的一種代表性疾病，如果失去了心肌細胞，就會引起心力衰竭等心臟疾病。心肌細胞幾乎沒有再生能力，一旦失去就不能再生。從前認為心臟當中沒有幹細胞，所以心肌沒有再生能力，但是近年的研究表明，成體心臟內部也會存在一些心肌幹細胞。賽百慷公司開發出一種新型心肌幹細胞培養方法，希望能為這項研究的科學工作者提供幫助。

細胞培養操作：

1.摘取出心臟，去掉心臟包膜，把心尖部分剪下來（心尖部分是心室部分，心肌細胞含量高）。

2.剪碎，移入15或50ml離心管中，用PBS多洗幾遍，盡量把血細胞洗掉。

3.加入2-3ml的50%血清+50%IMDM培養基，37℃、一小時浸泡。

4.採用貼塊法：用槍把組織塊連同培養基一同移入T25瓶中，然後用槍吸出培養基。在培養箱中放置1-2小時，待組織粘貼在瓶底后，加入3ml含20%血清的IMDM培養基。

5.在貼塊培養到第三、四天時，從組織塊上會脫落一些細胞團和單個細胞，收集到15ml離心管中。

6.採用300rpm離心（或自然沉澱），去上清，取沉澱部分的細胞培養（多為細胞團）。

7.用IMDM/DMEM/F12完全培養基培養：10%血清、30%IMDM、60%DMEM/F12、0.1mM β-ME、50xB27、20ng/ml bFGF、10ng/ml EGF。

8.細胞團中的細胞在第二天就會出現圓形擴散生長（呈集落生長，像太陽發光的模樣），細胞形態不像成纖維細胞那樣呈梭形狀，而是有些偏圓。

9.心臟幹細胞生長速度很快，兩三天就能長滿。