本次解讀發表在NatureMedicine(IF=29.886分)上一篇lncRNA文獻。首先介紹下文獻整體思路：lncRNA作為miRNAs的前體分子產生miR-100和miR-125b，然後miRNA通過參與激活Wnt信號通路介導結腸癌細胞對西妥昔單抗的耐葯機制。同時作者尋找到lncrna上游調控lncRNAMIR100HG的轉錄因子GATA6。下面就來詳細了解一下文章內容吧。

首先作者通過3D培養獲得結腸癌西妥昔單抗耐葯細胞系，並加以驗證：在對照組細胞中加入西妥昔單抗藥物,24h通過檢測增殖markerki67以及凋亡marker Caspase-3，發現對照組細胞增殖能力降低，凋亡增加，而耐葯細胞系無明顯變化，證明細胞獲得耐藥性。

作者通過全基因組測序以及RNA-Seq，在耐葯組與對照組間篩選到141個轉錄本上調，220個轉錄表達下調，在這些轉錄本中上調最明顯的是lncRNAMIR100HG ，同時還發現了上調最明顯miR-125b 以及miR-100 。研究發現，lncRNA MIR100HG與miR-125b 以及miR-100 表達密切相關，可能為兩種MIRNA的前體。

為了探究lncRNA MIR100HG 以及所表達的miR-125b 與miR-100在結腸癌西妥昔單抗耐葯過程中發揮的作用，作者在耐葯細胞中進行了miR-125b 與miR-100的敲減，發現耐葯組細胞克隆減少，裸鼠成瘤體積減小。而在對照組細胞中過表達miR-125b 與miR-100，發現細胞克隆增多，裸鼠成瘤體積增大。

為了探究miR-125b 與miR-100參與的西妥昔單抗的耐葯機制，作者尋找在耐葯組與對照組中表達下調的基因，篩選到wnt信號的負向調控因子DKK1 以及DKK3，在耐葯組中表達下調超過30倍，提示miR-125b 與miR-100 可能作用於wnt信號通路。

作者首先進行了雙熒光素酶報告實驗，證明miR-125b 、miR-100 與DKK1 以及DKK3存在靶向關係，可能參與抑制DKK1 以及DKK3的表達。同時，檢測其他wnt通路負向調控因子ZNRF3、 RNF43、APC2蛋白水平也發生了降低。

進而作者在耐葯細胞中檢測發現WNT信號通路激活。在耐葯組腫瘤模型鼠中，b-catenin 由胞質轉移至胞核。

以上實驗證明，miR-125b 與miR-100抑制了wnt信號通路負向調控因子的表達，進而激活了wnt信號通路。

那麼，在西妥昔單抗耐葯發生過程中，是什麼機制引起的miR-125b 與miR-100 表達上調呢？前面我們提到miR-125b與miR-100由MIR100HG 基因轉錄而來，作者推測可能存在調控MIR100HG的轉錄因子，進而影響miR-125b與miR-100的表達。

通過RNA-Seq 數據分析，作者關注到鋅指蛋白轉錄因子GATA6 ，在CC-CR細胞系中轉錄以及蛋白水平均表達下調。同時，在CC細胞株中敲減GATA6可以導致MIR100HG的表達上調，提示GATA6可能負向調控MIR100HG的表達。而MIR100HG啟動子區域也存在GATA6的結合位點，熒光素酶報告實驗證實過表達GATA6可以抑制MIR100HG的表達。

作者通過收集西妥昔單抗治療前患者腫瘤組織以及治療過程中耐葯腫瘤組織進行了驗證。藥物治療后，腫瘤組織中miR-100以及miR-125b表達顯著升高，細胞核內b-catenin 信號強於對照組。然而作者並沒有發現miR-100 與GATA6 (rs= −0.455, P = 0.187) 或者 miR-125b a與GATA6(rs = −0.515, P = 0.128)間存在明顯負相關關係。

以上臨床數據說明腫瘤組織中MIR100HG以及miR-100 、miR-125b上調可能是引起西妥昔單抗藥物抵抗的原因。

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