微生物多樣性取樣方法總結
最全的微生物多樣性樣品採集方法總結
樣品 第一站
樣本準備前注意事項
標本採集是否符合要求，直接影響檢驗質量。因此要求做到及時性、合理性、有效性、代表性，以下注意事項為取樣前讀原則：
A. 採集的標本應盛於無菌容器內，確保所採集的標本無外源性的污染；
B. 根據目的菌的種類（需氧菌、厭氧菌等）採用不同的方法採集標本；
C. 所採集的標本必須有代表性；
D. 採集量不得過少，否則提取的DNA量過少不能滿足後續實驗；
E. 對樣本的來源、採集過程和方法等作詳細記錄。
樣品 第二站
土壤、泥沙、岩石樣本
A. 選取採樣地點，除去土壤表層未分解的凋落物層，先多點 採集土壤表面腐殖質層，然後用土壤取樣器隨機多點分別採集 0~10cm 及 10~25cm土層土壤混合樣品；
Advertisements
B. 樣品帶回實驗室後過 2mm 篩后；3-5g分裝至EP管或凍存管中；
C. 迅速置於液氮中冷凍 3~4 小時，然後轉移至-80°C 或液氮中長期保存；
運送方式：乾冰運輸。
樣品 第三站
糞便、污泥樣本
A. 清晨採集動物的新鮮糞便或污泥樣品，放於無菌離心管或其它無菌容器中；
B. 樣品帶回實驗室後分裝至5mL或更大體積的離心管或凍存管中；或用PBS進行清洗，離心收集沉澱，分裝於2 mL離心管中；
C. 迅速置於液氮中冷凍 3~4 小時，然後轉移至-80°C 或液氮中長期保存；
D. 運送方式：乾冰運輸。
樣品 第四站
動物胃腸道樣本
A. 無菌條件下對動物個體進行處理，用75%酒精擦拭體表，用無菌解剖剪剪開動物腹部，取出胃腸道等目的器官，用PBS進行清洗，離心收集沉澱，分裝於2 mL無菌離心管中；
Advertisements
B. 迅速置於液氮中冷凍 3~4 小時，然後轉移至-80°C 或液氮中長期保存；
C. 運送方式：乾冰運輸。
樣品 第五站
水樣（海洋、湖泊、魚塘、自來水）
A. 採用三點取樣法取樣，取表層水，樣品用經過滅菌的潔凈純凈水瓶進行採集，採樣前用所采水樣將其反覆沖洗數遍；
B. 對於水質較為清澈（目測）的或微生物含量極其稀少的水樣如：自來水、井水、泉水等，用採集回來的水樣樣品至少1L通過 0.22μm 的微孔濾膜真空過濾，水樣中的總微生物被富集濾膜表面，液氮速凍3-5min，-80℃保存；
C. 對於水質較為混濁的（或微生物含量較為豐富的）水樣，如：海水，湖泊水，魚塘里的水，包括污水等。用採集回的水，三點水樣混合搖勻后取80mL分裝在兩個無菌的50mL的離心管，每個分裝40mL，防止分裝過滿，水樣冰凍后體積膨脹，導致離心管破裂，被其它微生物群體污染。液氮速凍3-5min，-80℃保存。
D. 運送方式：乾冰運輸。
樣品 第六站
茶葉、葉片表面微生物
A. 10克茶葉，加入50~100mL PBS緩衝液，振蕩30到60分鐘，150-200r/min，超聲5分鐘，再振蕩30到60分鐘，150-200r/min，取上清液加入到50mL離心管，1500 r/min離心1分鐘，將上清液轉移到另一個50mL離心管，12000 r/min離心10分鐘得菌體；
B. 迅速置於液氮中冷凍 3~4 小時，然後轉移至-80°C 或液氮中長期保存；
C. 運送方式：乾冰運輸。
以上是微生物多樣性測序最常見樣品的取樣建議，各位可以根據研究目的和樣品實際情況作為參考，若沒有涉及的樣品大家可以給我們留言。