兩產地栗蘑多糖的含量測定研究
兩產地栗蘑多糖的含量測定研究
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摘要 [目的]測定並分析比較 2個不同產地的栗蘑多糖含量。[方法]採用高溫高壓水提 乙醇沉澱法分別提取遷西栗蘑和浙江栗蘑 多糖，並採用紫外可見分光光度計測定其含量，經苯酚一硫酸顯色反應後於波長490 nm處進行測定。[結果]試驗得出，遷西栗蘑多糖含量為6．54％，浙江栗蘑為3．41％。表明兩地的栗蘑由於其人工栽培條件、生長環境及採摘時機等因素不同導致多糖含量具有明顯的差 異。[結論]研究可為栗蘑內在質量評價以及規範化種植提供參考依據。
關鍵詞 栗蘑；多糖 ；水提醇沉法；苯酚 一硫酸法
中圖分類號 $646 文獻標識碼 A 文章編號 0517—6611(2013)15—06876—02
Determination of Polysaccharide Content in G．frondosa from Two Producing Areas
WANG Feng·chun et al (Qianxi Chestnut Industry Research Development Center，Hebei Chestnut Project Research Center，Tangshan，
Hebei 064300)
Abstract [Objective]To determine and compare polysaccharide content in Grifola frondosa from two producing areas．[Method]H J【gh tem—
perature and high pressure water extraction and alcohol precipitation method was adopted to extract polysaccharides in G．frondosa from Qianxi
and Zhejiang，UV VIS spect 0photometer was used to determine its content，and was determined at wavelength 490 nm after phenol—sulfuric
acid chromogenic reaction．[Result]Th polysaccharide content in Qianxi G．frondosa is 6．54％，and in Zhajiang G．fro,wlosa is 3．41％，in- dicating that artificial cultivation conditions，growth environment and picking time are main factors for influencing different contents of polysac—
chafide．[Conclusion]rI1}le study will provide reference basis for inner quality evaluation and normalization planting of G．frondosa．
Key words Grifola frondosa；Polysaccharide；Water extraction and alcohol precipitation method；Phenol—sulfuric acid method
栗蘑又名灰樹花(Gr lafrorutosa)，日本稱舞茸，是一種葯食兼用的珍稀食用菌，富含多糖、氨基酸和多種礦質元素。栗蘑多糖(PGF)是栗蘑眾多生物活性物質中最主要的一類活性成分，它系從栗蘑的子實體或菌絲體與發酵液中分離得到的一類富含 B．1，6-糖苷鍵及 岱一1，3-糖苷鍵的真菌多糖⋯，具有顯著的抗腫瘤、降血脂 和調節免疫系統功能的作用 ]。研究發現，其抗癌的主要活性成分是 B一葡聚糖。但由於其野生資源缺乏，產品供不應求，近年來許多地區相繼進行了栗蘑的引種馴化和試驗栽培，河北省遷西和浙江省慶元等地已經實現了規模化生產 。筆者採用水提乙醇沉澱法分別提取遷西栗蘑和浙江栗蘑多糖，並採用苯酚 一硫酸法測定其含量，旨在為栗蘑的規範化種植提供參考依據。
1 材料與方法
1．1 材料
1．1．1 原材料。栗蘑由遷西縣板栗產業研究發展中心收集並鑒定，分別為河北遷西栗蘑和浙江慶元栗蘑。
1．1．2 主要儀器。高壓滅菌鍋、電熱鼓風乾燥箱 DGG-9030B，上海森信實驗儀器有限公司；恆溫振蕩器、電子天平
LT1001、紫外可見分光光度計，北京萊伯泰科儀器有限公司；移液器(1—5 rn1)。
1．1．3 主要試劑。濃硫酸(AR)，天津市翔宇化工工貿有限公司；苯酚(AR)，天津市大茂化學試劑廠；無水葡萄糖(AR)、無水乙醇(AR)，北京化學試劑。
1．2 方法
1．2．1 粟蘑多糖的提取。將自然條件下晒乾的栗蘑置於乾燥箱(60℃)烘3 h備用。準確稱取栗蘑干品40 g置於蒸
滅菌鍋中，加入1 000 ml蒸餾水浸泡2 h后將提取液倒出，再加入 1 000 ml蒸餾水加熱2 h，取提取液，合併2次提取液並
用紗布過濾後置於恆溫鼓風乾燥箱中濃縮(120℃)，當濃縮液變稠時將溫度降至 85℃恆溫烘48 h，出現的深紅色物質即為栗蘑粗糖肽。按上述方法將遷西栗蘑和浙江栗蘑分別做5個平行樣。
1．2．2 粗糖的提純。精密稱取粗多糖0．2 g溶於5 rnl蒸餾水中，振蕩3 h後過濾，濾液加入無水乙醇，振蕩 2 h后離心
分離取其沉澱，該沉澱為提純的栗蘑水溶性多糖。
1．2．3 5％苯酚試劑的配置。取苯酚加熱蒸餾收集 182℃的餾分，吸取此餾分5 rnl置棕色瓶內，加入 95 rnl蒸餾水。
放冰箱備用。
1．2．4 對照品溶液的配置。葡萄糖 105℃乾燥至恆重，精密稱取25 mg溶於250 ml水中即得0．1 mg／ml葡萄糖溶液。
2 結果與分析
2．1 標準曲線的繪製 按表 1配製不同濃度葡萄糖溶液置於7支具塞試管中，在每支試管均準確滴加 1 ml苯酚(5％)，5 rnl濃硫酸，室溫放置20 min後於490 nm波長測定吸光度。以標準葡萄糖含量為橫坐標，以吸光度值為縱坐標，繪製標準曲線，結果見表 2。標準曲線線性回歸方 Y=0．008 7x+0．061 7，相關係數 r=0．999 6。表明葡萄糖濃度在 l0～80ml範圍內和吸光度呈現良好的線性關係。
表1 葡萄糖溶液配置
41卷 15期 王鳳眷等 兩產地栗蘑多糖的含量測定研究 6877
表2 栗蘑多糖標準曲線
2．2 多糖含量的比較 採用苯酚 一硫酸法測定多糖的含量。將經過提純的栗蘑多糖溶於25 ml蒸餾水中，製成溶液。精確移取0．02 ml於試管中，加蒸餾水至 1 rnl，再加入 1 ml濃度為5％的苯酚溶液，然後加入 5 IIl1濃硫酸，混勻後放置 20min冷卻至室溫。在490 nm波長下測定吸光度，結果得出，遷西栗蘑多糖平均含量為6．54％，浙江栗蘑多糖平均含量為
3．41％(表 3、4)。
表3 遷西栗蘑的多糖含量
圖5 不同熱處理后真空乾燥處理對香菇中甲醛含量的影響程中的甲醛含量變化具有重要的意義。該研究發現，乾燥方
式的不同對香菇中甲醛有明顯影響：香菇乾燥后其甲醛含量均有明顯升高，干制過程中，前期升溫慢，甲醛含量升得也慢；一MU期升溫快，香菇中甲醛含量升得也快，但其甲醛的含量均符合300 mg／kg的要求 。為了減少干香菇中甲醛含量，在對鮮香菇進行乾燥前，先進行鈍化酶的熱處理再進行乾燥
3 結論與討論
採用高溫高壓水浸提 一乙醇沉澱法分別提取遷西栗蘑多糖和浙江栗蘑多糖，並採用苯酚 一硫酸法測定了多糖的含量。栗蘑多糖在硫酸的作用下先水解成單糖，並迅速脫水生成糖醛衍生物，然後與苯酚生成橙黃色化合物且顏色穩定，此溶液在490 nm波長處有特徵吸收，可測多糖含量，結果準確，重現性好。以栗蘑有效成分之一粟蘑水溶性多糖作為栗蘑的品質標準進行了測定和比較。試驗結果表明，遷西栗蘑和浙江栗蘑由於其人工栽培條件和生長環境的不同等因素，導致多糖含量具有明顯的差異。遷西栗蘑多糖含量較高的原因在於採摘期早，栗蘑孢子未彈射出菇體，主要藥用成分充足，就像是麥粒穀粒沒有脫落一樣。所以為保持較好的質量必須適時採摘。因為栗蘑屬於多孔菌類，灰栗蘑將成熟時，在菌蓋的背面和菌柄分枝的側面，都會長出密密的管狀菌孔即多孔現象。多孔現象剛開始出現，即為採收的最佳時期。這時，子實體的個體不會再長大，而且營養含量高；如果多孔現象非常明顯，菌孔已經長大了，說明栗蘑已經老化，營養含量較低，品質較差 。
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