木犀草素聯合蘆丁抗6-羥多巴胺誘導的帕金森病大鼠震顫及神經保護作用

2012年5月發表於【中國藥理學通報】

- 中國醫學科學院 北京協和醫學院藥物研究所「藥物靶點研究與 新葯篩選」北京市重點實驗室：何國榮，成銀霞，穆鑫，李曉秀，王月華，方蓮花，杜冠華

- 煙台大學藥學院藥理學教研室：於 昕

摘要：目的-探討木犀草素luteolin和蘆丁rutin組合物（MLR）對6-羥多巴胺誘導的帕金森病模型大鼠減輕震顫和保護神經元的作用及機制。方法-運用6-羥多巴胺兩點注射法，損毀大鼠左側中腦多巴胺能神經元，複製帕金森病模型。2周后，將造模成功大鼠隨機分為模型組、美多芭給葯組(50 mg·kg －1) 、 MLR給葯組( 125、 250、 375 mg·kg －1)，另取手術並注射生理鹽水、經檢測無旋轉運動的大鼠為假手術組。在給葯后第 3 周記錄大鼠後肢肌電( EMG)，觀察肌肉震顫。行為學檢查完畢后採用免疫組化法檢測大鼠黑質酪氨酸羥化酶( TH) 、多巴胺轉運體( DAT) 、膠質原纖維酸性蛋白(GFAP) 陽性細胞 數。結果 EMG檢測結果顯示，MLR各給葯組可明顯降低大鼠的震顫頻率和幅度，中、高劑量組的作用優於美多芭組。免疫組化結果顯示，MLR高劑量組TH 免疫陽性神經元的數 目約為模型組的 499. 14%， MLR 高劑量組 GFAP 免疫陽性星形膠質細胞的數目比模型組降低了 43.68%。結論：木犀草素luteolin和蘆丁rutin的組合物可劑量依賴性抑制 PD模型大鼠震顫，減輕神經元受損程度，抑制星形膠質細胞激活和促炎因子釋放，從而延緩 多巴胺能神經元進行性退變。

關鍵詞：木犀草素，蘆丁，帕金森病，6-羥多巴胺，震顫，神經保護

帕金森病( Parkinson』 sdisease，PD)是中腦黑質進行性退變而引起的神經退行性疾病， PD的發生與年齡老化、環境毒素以及遺傳易感性等因素有關。 藥物治療是目前治療 PD的主要方法，較為有效的是以左旋多巴為代表的多巴胺(dopamine，DA) 替代療法，然而，長期應用左旋多巴會出現運動波動和運動障礙等副作用，使用後期還會加速 PD自然病程。針對其他靶點的藥物也存在療效不理想、副作用大等缺陷。因此，尋找療效確切且副作用小的藥物成為抗 PD 藥物研究的熱點。

木犀草素( luteolin)廣泛分佈在金銀花、菊花、青蘭、紫蘇、白毛夏枯草等植物中，具有抗氧化、抗炎、抗過敏、抗腫瘤、抗菌、抗病毒等藥理作用，臨床用於治療腫瘤、肝炎、肌萎縮性脊髓側索硬化症等。近期研究發現木犀草素能夠抑制神經元氧化應激損傷，具有神經保護作用。蘆丁( rutin)又名芸香苷，是主要存在於芸香全草、豆科植物槐的花蕾、果實、金絲桃科植物紅旱蓮全草及蓼科植物蕎麥籽苗中的一種黃酮類化合物。研究表明蘆丁具有止血、降壓、抗炎、抗病毒、舒張血管、抑制腦梗死等多方面的生物學活性，其復方製劑對心腦血管疾病有明顯的治療作用，特別是血管性痴獃。這些研究結果提示木犀草素和蘆丁均對神經退行性疾病可能有較好的療效。

肌電活動的測試表明，木犀草素和蘆丁復方劑中、高劑量組改善模型動物震顫的作用優於陽性對照葯美多芭組。

討論：靜止性震顫是PD主要臨床特徵之一。目前認為，PD患者靜止性震顫主要與基底神經節－丘腦－皮層傳遞環路有關。黑質－紋狀體多巴胺能神經纖維變性使這一環路中具有節律性放電活動的神經元活動增強並同步化，最後通過運動皮質的節律性興奮而產生震顫。目前，臨床針對靜止性震顫主要採用多巴胺替代療法、抗膽鹼藥物、選擇性乙醯膽鹼受體拮抗劑等進行治療，由於不良反應明顯、難以控制疾病病理進程等原因，亟需研發療效明顯、毒副作用小的抗PD藥物。

本研究結果顯示，MLR各給葯組大鼠旋轉圈數在給葯前後沒有變化，與模型組相比差異也無顯著性，表明MLR對APO誘導的大鼠旋轉運動沒有影響，提示MLR抑制震顫的作用不是通過多巴胺受體產生的。行為學觀察證實，MLR對大鼠的運動障礙有改善趨勢。但是，目前還缺少可靠的量化指標對運動障礙進行評價。本研究首次將EMG檢測用於評價PD模型大鼠的震顫程度。結果表明，美多芭和MLR各劑量對大鼠震顫頻率和幅度有明顯的抑制作用，且MLR各給葯組具有良好的量效關係。該檢測方法的建立為抗PD藥物藥效學研究與作用機制考察提供了更有效的評價技術。

靜止性震顫即可以是中樞性震顫也可以是外周性震顫。在減輕震顫方面，MLR是否直接抑制外周神經傳導速度，目前仍不清楚。因此，考察了對正常大鼠外周神經傳導速度的影響。實驗結果表明MLR抑制大鼠震顫與外周神經沒有直接關係。本研究中， 6-OHDA定位注射造成黑質星形膠質細胞數目增多，這與已有的研究報道一致。隨著病程的進展，激活的星形膠質細胞釋放大量促炎因子導致神經元變性死亡。前期研究發現，木犀草素和蘆丁的神經保護作用均與其抗氧化、抗炎作用相關。本實驗顯示，MLR可明顯增加 TH 陽性細胞數目，並改善細胞狀態。另外GFAP 陽性計數與 TH 陽性計數相關性分析顯示， GFAP細胞數與TH細胞數呈負相關，表明星形膠質細胞反應性增生與DA能神經元凋亡有關，而 MLR 可明顯降低 GFAP 陽性細胞數，提示MLR 能夠抑制星形膠質細胞釋放促炎因子。

在PD發病過程中，各種損傷因素最終通過引起神經細胞損傷及凋亡導致功能障礙，到目前為止還沒有任何一種藥物或治療方式能夠完全阻斷PD的進程。本研究證實，連續給葯3周，MLR可以劑量依賴性減輕大鼠震顫頻率和幅度，表明 MLR 在減輕模型動物震顫方面具有獨特的優勢。此外，MLR能夠減輕6-OHDA造成的 DA能神經元損傷、抑制星形膠質細胞釋放促炎因子，部分恢復DA能神經元功能，延緩PD病理進程。本研究為其進一步臨床應用提供了重要的基礎實驗數據。

目前世界上商業化的高純度木犀草素和蘆丁復方劑MLR僅有美國的盧特康，其產品的木犀草素純度達99.8%，蘆丁純度達100%。盧特康在2002年就已經獲得了該複合劑的美國/德國/法國的專利，在美國市場上廣泛流傳在帕金森病、艾爾茲海默症（嚴重的老年痴獃）、肌肉側索萎縮症、兒童自閉症等神經退行性患者中作為有效的輔助治療手段。

（元於健康）